我们的Live或Dead 可固定死细胞染色试剂盒是用于标记细胞的一组工具，用于细胞功能的荧光显微镜研究。 细胞的有效标记为研究时空背景下的细胞事件提供了一种有力的方法。 该特定试剂盒设计用于在红色荧光中均匀标记固定的哺乳动物细胞，以用于蓝色或绿色激发光激发的流式细胞仪应用。 该试剂盒使用专有的红色荧光染料，与细胞成分结合后会发出更多的荧光。 试剂盒中使用的荧光染料被蓝色（488 nm）和绿色激光（532 nm）充分激发到620 nm的荧光。 该试剂盒为所有基本组件提供了优化的细胞标记方案。 它是保存特定细胞荧光图像的工具，也可用于荧光流式细胞仪应用。

样品实验方案

简要概述

1.在HHBS中制备样品（0.5 mL /测定）
2.替换为HHBS
3.将Stain It 反应性染料添加到细胞悬液中
4.在室温或37°C下将细胞染色20-60分钟
5.清洗细胞
6.修复细胞（可选）
7.使用适当的激发/发射滤光片，用流式细胞仪和/或荧光显微镜检查样品

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Stain It 活性染料原液（500X）：
将200 µL DMSO（组分B）添加到Stain It 反应性染料（组分A）的小瓶中，以得到500X Stain It 反应性染料储备液。

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样品示例及操作

1.使用1X Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的无叠氮化钠和无血清/蛋白质的缓冲液制备细胞。

2.用HHBS或您选择的无叠氮化物和无血清/蛋白质的缓冲液洗涤细胞一次。

3.以5-10×106 / mL的浓度在HHBS或您选择的无叠氮化物和无血清/蛋白质的缓冲液中重悬细胞。

4.将1 µL 500X Stain It 活性染料储备液添加到0.5 mL细胞/测定中，并充分混合。

5.在室温或37°C，5％CO2的培养箱中避光保存20-60分钟。 注意：应根据不同细胞系实验确定的染色浓度和孵育时间。

6.洗涤细胞两次，然后用HHBS或您选择的缓冲液重悬细胞。

7.根据需要固定细胞（可选）。

8.使用适当的激发/发射滤光片，使用流式细胞仪和/或荧光显微镜分析细胞。

 

参考文献

Autophagy proteins are not universally required for phagosome maturation
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Journal: Autophagy (2016): 1440--1446

Differential detection of tumor cells using a combination of cell rolling, multivalent binding, and multiple antibodies
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Versatile fabrication of nanoscale sol--gel bioactive glass particles for efficient bone tissue regeneration
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Journal: Journal of Materials Chemistry (2012): 16906--16913

Advanced glycation end-products increase IL-6 and ICAM-1 expression via RAGE, MAPK and NF-$\kappa$B pathways in human gingival fibroblasts
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Journal: Journal of Periodontal Research

 

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