钙黄绿素红,AM是美国AAT Bioquest生产的用于检测活细胞的荧光探针，Calcein AM是用于标记和检测活细胞细胞功能的流行的荧光探针之一。然而，Calcein AM的单色使得在多色应用中不可能使用这种有价值的试剂。例如，由于与GFP相同的颜色，不可能将Calcein AM与GFP-转化细胞组合使用。为了解决Calcein AM的这种颜色限制，我们开发了Calcein Orange ，Calcein Red 和Calcein Deep Red 。这些新的Calcein AM类似物与Calcein AM结合使用，可以对活细胞进行多色标记和功能分析。非荧光Calcein Red AM可以轻松进入活细胞并水解产生强荧光Calcein Red 染料。可以使用常见的TRITC / Cy3滤波片组检测Calcein Red 染料。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙黄绿素红,AM。

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Calcein Red AM原液。
2.1使用Calcein Red AM的量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Calcein Red TM AM与492.23μL无水DMSO混合。

3.使用10μMCalceinRed AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1终孔内浓度的Calcein Red AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的终井内浓度：0.04％
3.3终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中，混合16μL的Calcein Red AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议Calcein Red AM的终浓度为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127孔浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调节至以下：5μM的Calcein Red AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 560/574 nm运行实验。