产品信息

名称PUMC-HUVEC-T1（SV40T转化人脐静脉内皮细胞）

种属人

生长特性贴壁

细胞形态上皮细胞样

背景描述PUMC-HUVEC-T1形态呈现为典型的鹅卵石样排列，已证明在体外可传至40代。PUMC-HUVEC-T1内皮标记vWF、CD31、CD34均阳性，可结合凝集素，电镜下可见紧密连接和W-P小体，Matrigle上可形成管型。不同代数的HUVEC-T1细胞核型正常稳定（P12、P13、P19、P38），裸鼠体内接种不成瘤（P9和P33）。

生长培养基DMEM＋0.01mg/mL Insulin＋1%NEAA+10%FBS(164210)＋1%P/S

推荐换液频率2~3次/周

冻存条件冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮

培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。

4.收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

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