Ex (nm) | 562 | Em (nm) | 576 |
分子量 | 1015.79 | 溶剂 | DMSO |
存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
钙黄绿素红,AM是美国AAT Bioquest生产的用于检测活细胞的荧光探针,Calcein AM是用于标记和检测活细胞细胞功能的流行的荧光探针之一。然而,Calcein AM的单色使得在多色应用中不可能使用这种有价值的试剂。例如,由于与GFP相同的颜色,不可能将Calcein AM与GFP-转化细胞组合使用。为了解决Calcein AM的这种颜色限制,我们开发了Calcein Orange ,Calcein Red 和Calcein Deep Red 。这些新的Calcein AM类似物与Calcein AM结合使用,可以对活细胞进行多色标记和功能分析。非荧光Calcein Red AM可以轻松进入活细胞并水解产生强荧光Calcein Red 染料。可以使用常见的TRITC / Cy3滤波片组检测Calcein Red 染料。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的钙黄绿素红,AM。
适用仪器
流式细胞仪 | |
Ex: | 532/561 nm |
Em: | 585/40 nm |
荧光显微镜 |
|
Ex: | TRITC 滤波片组 |
Em: | TRITC 滤波片组 |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
荧光酶标仪 |
|
Ex: | 540 nm |
Em: | 590 nm |
Cutoff: | 570 nm |
推荐孔板: | 黑色透明底板 |
读取模式: | 底读模式 |
操作步骤
1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Calcein Red AM原液。
2.1使用Calcein Red AM的量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg Calcein Red TM AM与492.23μL无水DMSO混合。
3.使用10μMCalceinRed AM 4在HHBS中制备2X工作溶液,0.08%Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1终孔内浓度的Calcein Red AM:5μM
3.2Pluronic®F-127的终井内浓度:0.04%
3.3终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中,混合16μL的Calcein Red AM,25.6μL的10%Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议Calcein Red AM的终浓度为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127孔浓度终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的终浓度调节至以下:5μM的Calcein Red AM,0.04%Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。然后,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 560/574 nm运行实验。